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工作原理：

同時，為了減少內在的變化因素（如：培養細胞的數目和活力的差別，細胞轉染和裂解的效率等）對實驗準確性的影響，將帶有海腎熒光素酶基因（Rinilla luciferase）的質粒（phRL-TK）作為對照質粒與報告基因質粒共轉染細胞，提供轉染活力的內對照，使測試結果不受實驗條件變化的干擾。

在測量過程中，當加入熒光素酶檢測試劑II（LARII）時產生螢火蟲熒光信號，這樣測量螢火蟲熒光素酶報告基因。定量螢火蟲熒光強度之后，再在同一樣品中加入Stop & Glo^?，將上述反應猝滅，并同時啟動海參熒光素酶反應，同時進行第二次測量。

具體步驟：

⑴ 初次使用時，配制LAR II，即Firefly luciferase的底物。將LAR II溶解在LAR II buffer中，并分裝-80℃避光保存；

⑵ 轉染后的細胞棄掉培養基，用PBS清洗兩次，每孔加入100 μl的PLB（Passive Lysis Buffer）室溫輕微振蕩15 min，收集細胞裂解液；

⑶ 將20 μl細胞裂解液加入發光板后，用GloMax生物發光檢測儀讀取背景值2 s；

⑷ 每樣品加入100  μl LAR II工作液，快速混勻，檢測讀數，即為Firefly luciferase的值；每樣品再加入100 ul Stop&Glo，快速混勻，再次讀數，即為Renilla luciferase的值。

⑸ 數據處理。首先計算出每管的Firefly luciferase/Renilla luciferase的比值，再以control組的比值為單位1，即可得到不同處理組的相對luciferase活性，也就是該處理組基因轉錄的調控活性。
客戶提供：
1.需提供詳細的轉錄因子、目的基因或microRNA信息；

2.實驗細胞，如無特殊要求，洛唯爾默認為使用293T細胞，則無需提供；

*終交付：

實驗原始數據和實驗報告單。

服務案例：