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穩轉細胞株構建
來源: | 作者:1 | 發布時間: 1883天前 | 860 次瀏覽 | 分享到:
外源基因在細胞中表達可分為兩大類,一類是瞬時表達,一類是穩定表達(**表達)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平的水平,但通常只持續幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩定細胞株,一般是根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。

工作原理:

外源基因在細胞中表達可分為兩大類,一類是瞬時表達,一類是穩定表達(**表達)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平的水平,但通常只持續幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩定細胞株,一般是根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。

穩轉細胞細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后,通過抗性篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經細胞克隆挑選得到的,由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統一,傳代過程中細胞的基因表達保持穩定。

實驗流程:


客戶提供:

A:目的基因信息;

B:載體構建詳情。

*終交付:

A: 穩定轉染細胞株,凍存的細胞1ml/支,細胞數量為2*106/ml

B:詳細實驗報告單。

服務案例:

  
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