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凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)
來(lái)源: | 作者:3 | 發(fā)布時(shí)間: 1844天前 | 1838 次瀏覽 | 分享到:
凝膠遷移實(shí)驗(yàn)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)*初用于研究DNA結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

基本原理:

通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNARNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類(lèi)的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。

應(yīng)用

1)研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用;

2)可用于DNA定性和定量分析;

3)用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。


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