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RNA甲基化修飾(m6A)整體解決方案
來源: | 作者:1 | 發布時間: 1883天前 | 2297 次瀏覽 | 分享到:
已知RNA存在超過100種修飾。在真核生物中,5’端的Cap以及3’端的polyA修飾在轉錄調控中起到了十分重要的作用,而mRNA的內部修飾則用于維持mRNA的穩定性。mRNA*常見的內部修飾包括N6-腺苷酸甲基化(m6A)、N1-腺苷酸甲基化(m1A)、胞嘧啶羥基化(m5C)等。RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上,而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*為普遍的修飾。目前發現miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都發生m6A修飾。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化轉移酶的作用下對RNA上的腺嘌呤(A)進行m6A 修飾,再在去甲基化酶的作用下對已發生m6A修飾的RNA進行去甲基化修飾。*后發生m6A修飾的RNA通過被甲基化閱讀蛋白識別后,行駛下游的一系列功能,包括miRNA加工、mRNA出核翻譯及剪切等。每個標記都需要一個“寫入器(writer)”來放置,一個“擦除器(eraser)”消除,還需要“閱讀器(reader)”讀取。m6A修飾不僅會影響RNA剪接,還會影響翻譯和RNA穩定性。

背景介紹:

已知RNA存在超過100種修飾。在真核生物中,5’端的Cap以及3’端的polyA修飾在轉錄調控中起到了十分重要的作用,而mRNA的內部修飾則用于維持mRNA的穩定性。mRNA*常見的內部修飾包括N6-腺苷酸甲基化(m6A)、N1-腺苷酸甲基化(m1A)、胞嘧啶羥基化(m5C)等。RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上,而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*為普遍的修飾。目前發現miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都發生m6A修飾。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化轉移酶的作用下對RNA上的腺嘌呤(A)進行m6A 修飾,再在去甲基化酶的作用下對已發生m6A修飾的RNA進行去甲基化修飾。*后發生m6A修飾的RNA通過被甲基化閱讀蛋白識別后,行駛下游的一系列功能,包括miRNA加工、mRNA出核翻譯及剪切等。每個標記都需要一個“寫入器(writer)”來放置,一個“擦除器(eraser)”消除,還需要“閱讀器(reader)”讀取。m6A修飾不僅會影響RNA剪接,還會影響翻譯和RNA穩定性。

RNA甲基化酶類型總結:




m6A甲基化檢測方法:

1.LC-MS/MS:在液相質譜的基礎上采用串聯質譜,能夠獲得分子離子峰,可對堿基同時進行定性和定量分析;
2.m6A定量檢測試劑盒(比色法):采用類似于ELISA抑制競爭免疫的方法,能夠定量檢測總RNA中m6A試劑;;
3.RNA甲基化定量檢測試劑盒(熒光法):使用高效RNA結合液將總RNA綁定在孔板上,使用捕獲和檢測抗體對m6A進行檢測;
4.Dot blotting:將m6A修飾的RNA固定在尼龍膜上,然后用m6A抗體進行免疫反應;
5.m6A-seq:使用帶有m6A抗體的免疫磁珠對發生m6A甲基化的mRNA片段進行富集,然后將富集到的mRNA片段純化后構建高通量測序文庫進行上機測序。

RNA甲基化研究思路:



客戶提供:

RNA含量≥800μg或細胞數目≥109



  
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